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十月底，諾華的CTL019之后，F(xiàn)DA公布Kite公司的Yescarta CAR-T免疫細(xì)胞療法成為FDA認(rèn)證的第二個(gè)基因療法。自從Emily Whitehead帶來癌癥治愈新希望后，CAR-T免疫細(xì)胞療法再次穩(wěn)固了它免疫細(xì)胞療法領(lǐng)域的中心地位。
CAR-T免疫細(xì)胞療法流程
1、從癌癥病人身上獲取T細(xì)胞。
2、利用基因工程技術(shù)給T細(xì)胞加入嵌合抗體。
3、體外培養(yǎng)，大量擴(kuò)增CAR-T細(xì)胞。
4、擴(kuò)增好的CAR-T細(xì)胞輸回病人體內(nèi)。
CAR-T免疫細(xì)胞療法的T細(xì)胞來自外周血（PBMC）。臨床研究表明，T細(xì)胞進(jìn)行亞群分選后的CAR-T療效更好。諾華和Kite的 CAR-T 產(chǎn)品使用的都是固定比例的 CD4+/CD8+T 細(xì)胞4。
用于CAR-T基因改造的人外周血T細(xì)胞的選擇依據(jù)1,2：
1.初始細(xì)胞比效應(yīng)細(xì)胞好。
Nature 3月的CAR-T綜述總結(jié)了選擇合適的人外周血T細(xì)胞亞群有利于臨床治療。
圖a：T細(xì)胞亞群的分化：TN到TCM細(xì)胞仍保有自我更新能力。選擇分化程度較低的初始T細(xì)胞（TN），記憶T細(xì)胞（TSCM或TCM）而不是分化末端的效應(yīng)T細(xì)胞用于基因改造可能會(huì)帶來更大治療效應(yīng)。
2.固定T細(xì)胞各亞群的比例
而由福瑞德·哈金森癌癥研究中心(Fred Hutchinson Cancer Research Center)主導(dǎo)的一項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展是使用固定比例的CD4+/CD8+T細(xì)胞（NIH：NCT01865617，CD4：CD8=1：1）。
StemCell：CAR-T免疫細(xì)胞療法-T細(xì)胞負(fù)選產(chǎn)品
CAR-T免疫細(xì)胞療法-人T細(xì)胞和亞群的負(fù)選產(chǎn)品（Human T Cell and Subset Isolation by negative Selection）
細(xì)胞類型 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 純度 | 適用的染色抗體 |
初始Pan-T 細(xì)胞 | 17961 17961RF | EasySep Human Naïve PanT Cell Isolation Kit EasySep™人初始Pan-T細(xì)胞分選試劑盒 | 96.1±2.3% | CD3（貨號(hào) #60011） CD4（貨號(hào) #60016） CD8a（貨號(hào) #60022） CD45RO（貨號(hào) #60097） |
T細(xì)胞 | 17951 17951RF | EasySep Human T Cell Isolation Kit EasySep™人T細(xì)胞分選試劑盒 | 96.7 ± 1.5% | CD2（貨號(hào)#60007） CD3（貨號(hào)#60011） CD4（貨號(hào)#60016） CD8a（貨號(hào)#60022） CD45（貨號(hào)#60018） |
19051 19051RF | EasySep Human T Cell Enrichment Kit EasySep™人T細(xì)胞富集試劑盒 | 95.0 - 99.0% |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-人CD4+T細(xì)胞及亞群的負(fù)選產(chǎn)品（Human CD4+T Cell and Subset Isolation by negative Selection）
細(xì)胞類型 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 純度 | 適用的染色抗體 |
CD4+T細(xì)胞 | 17952 17952RF | EasySep Human CD4+ T Cell Isolation Kit EasySep™人CD4+T細(xì)胞分選試劑盒 | 94.8 ± 2.3% | CD3（貨號(hào) #60011） CD4（貨號(hào) #60016） CD8a（貨號(hào) #60022） CD45（貨號(hào) #60018） |
19052 19052RF | EasySep Human CD4+ T Cell Enrichment Kit EasySep™人CD4+T細(xì)胞富集試劑盒 | 92.0 - 97.0% | ||
靜息CD4+ T細(xì)胞 | 17962 17962RF | EasySep™人靜息CD4+ T 細(xì)胞分選試劑盒 | 89.0 ± 5.3% | CD3（貨號(hào) #60011） CD8（貨號(hào) #60022） CD25（貨號(hào) #60153） |
初始CD4+ T細(xì)胞 | 17555 17555RF | EasySep™人初始CD4+ T細(xì)胞分 選試劑盒II | 96.6 ± 1.5% | CD3（貨號(hào) #60011） CD4（貨號(hào) #60016） CD45（貨號(hào) #600） CD45R（貨號(hào) #60097） |
19555 19555RF | EasySep™人初始CD4+ T細(xì) 胞分選試劑盒 | 91.3 - 96.9% | ||
19155 19155RF | EasySep™人初始CD4+ T細(xì) 胞富集試劑盒 | 91.0 - 95.0% | ||
記憶CD4+ T細(xì)胞 | 19157 19157RF | EasySep™人記憶CD4+ T 細(xì)胞富集試劑盒 | 86.0 - 98.0% |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-人CD8+ T細(xì)胞及亞群的負(fù)選產(chǎn)品（Human CD8+ T Cell and Subset Isolation by Negative Selection）
細(xì)胞類型 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 純度 | 適用的染色抗體 |
CD8+ T細(xì)胞 | 17953 17953RF | EasySep™人CD8+ T細(xì)胞分選試劑盒 | 85.6 ± 4.9% | CD3（貨號(hào) #60011） CD4（貨號(hào) #60016） CD8a（貨號(hào) #60022） CD45（貨號(hào) #60018） |
19053 19053RF | EasySep™人CD8+ T細(xì)胞富集試劑盒 | 84.0 -95.0% | ||
初始CD8+ T細(xì)胞 | 19258 19258RF | EasySep™人初始CD8+ T細(xì)胞分選試劑盒 | 92.3 ± 4.0% | CD3（貨號(hào) #60011） CD8a（貨號(hào) #60022） CD45（貨號(hào) #60018） CD45R（貨號(hào) #60097） CD56（貨號(hào) #60021） |
19158 19158RF | EasySep™人初始CD8+ T細(xì)胞富集試劑盒 | 85.0 - 92.0% | ||
記憶CD8+ T細(xì)胞 | 19159 19159RF | EasySep™人記憶CD8+ T細(xì)胞富集試劑盒 | 72.0 - 92.0% | CD3（貨號(hào) #60011） CD8a（貨號(hào) #60022） CD45（貨號(hào) #60018） CD45R（貨號(hào) #60097） |
以上產(chǎn)品適用處理PBMC ，1 x 109個(gè)細(xì)胞。
文獻(xiàn)版CAR-T免疫細(xì)胞療法-細(xì)胞分選產(chǎn)品
文獻(xiàn) | 疾病 | 靶點(diǎn) | CAR-T細(xì)胞工程 | 細(xì)胞分選產(chǎn)品 | 貨號(hào) |
1 | 常見肝癌HCC（hepatocellular carcinoma ） | HCC特異性分泌蛋白抗原（alpha-fetoprotein ，AFP） | —— | EasySep™ Human T Cell Isolation Kit | 17951 17951RF |
2 | 多種腫瘤：carcinomas, neuroblastomas and leukemias等 | 多種腫瘤 | 表達(dá)自然殺傷細(xì)胞受體1（NCR1 ，natural cytotoxic receptor 1） | EasySep™ Human T Cell Isolation Kit
| 17951 17951RF |
3 | —— | 抗原A激發(fā)CAR的表達(dá)，抗原B激活CAR T細(xì)胞 | 雙受體系統(tǒng)，組合 | RosetteSep™ Human CD4+ T Cell Enrichment Cocktail and RosetteSep™ Human CD8+ T Cell Enrichment Cocktail | 15022，15062和 |
4 | 實(shí)體瘤 | —— | CD4+T細(xì)胞激發(fā)系統(tǒng)免疫 | EasySep™ Mouse T Cell Isolation Kit | 19851 19851RF |
1.Liu H et al. (2017) Targeting alpha-fetoprotein(AFP)-MHC complex with CAR T-cell therapy for liver cancer. Clin Cancer Res 23(2): 478-88.
2.Tal Y et al. (2014) An NCR1-based chimeric receptor endows T-cells with multiple anti-tumor specificities. Oncotarget 5(21): 10949-58.
3.Roybal KT et al. (2016). Precision tumor recognition by T cells with combinatorial antigen-sensing circuits. Cell 164(4): 770-9.
4.Spitzer MH et al. (2017). Systemic immunity is required for effective cancer immunotherapy. Cell 168(3): 487-502.
說明
1.RF：貨號(hào)后加RF，比如17951RF，代表RoboSep™試劑盒：包含EasySep™分選試劑盒、RoboSep™緩沖液和1-2盒RoboSep™槍頭。
2.分選試劑盒和富集試劑盒的主要區(qū)別：分選試劑盒是富集試劑盒的更新版，實(shí)驗(yàn)耗時(shí)更少。
CAR-T免疫細(xì)胞療法配套產(chǎn)品
品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
StemCell | 18000 | EasySep Violet Magnet無柱免疫磁珠分選磁極 |
StemCell | 10981 | ImmunoCult™-XF T Cell Expansion Medium 無血清T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基 |
StemCell | 20144 | EasySep™ Buffer |
TAKARA | T100B | RetroNectin®Recombinant Human Fibronectin Fragment 重組人纖粘連蛋白，和激發(fā)型CD3單抗共同刺激T細(xì)胞增殖 |
TAKARA | T100A |
CAR-T免疫細(xì)胞療法產(chǎn)品：CD3-CD28激發(fā)型單抗用于CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)
品牌 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
Gibco | 11131D 11132D 11161D | Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28 |
PeproTech/BioGems | 05121-25-500 | Anti-Human CD3 mAb （克隆號(hào)OKT3） |
PeproTech/BioGems | 10311-25-500 | Anti-Human CD28 mAb（克隆號(hào)CD28.2） |
StemCell | 10971 | ImmunoCult™Human CD3/CD28 T Cell Activator |
StemCell | 10970 | ImmunoCul™Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator |
CAR-T免疫細(xì)胞療法產(chǎn)品-臨床級(jí)CART制備方案
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
200-070-132 | CliniMACS CD4 Reagent CE |
200-070-115 | CliniMACS D8 Reagent |
200-070-119 | CliniMACS CD62L Reagent CE |
200-070-131 | CliniMACS CD25 Reagent, CE |
200-070-146 | CliniMACS CD45RA Reagent |
200-070-117 | CliniMACS CD19 Reagent, CE |
200-070-118 | CliniMACS CD14 Reagent, CE |
200-073-104 | CliniMACS Tubing Set, CE |
130-097-184 | CliniMACS Prodigy TS 510 for Research Use |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-T細(xì)胞和初始T細(xì)胞分選
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
130-091-114 | CD2 MicroBeads, human |
130-050-101 | CD3 MicroBeads, human |
130-098-193 | MACSxpress Pan T Cell Isolation Kit |
130-096-535 | Pan T Cell Isolation Kit, human |
130-091-264 | CD6 MicroBeads, human |
130-093-247 | CD28 MicroBead Kit, human |
130-097-095 | Naive Pan T Cell Isolation Kit, human |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-CD4+ T細(xì)胞產(chǎn)品
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
130-045-101 | CD4 MicroBeads |
130-055-101 | CD4 Multisort Kit, human |
130-096-533 | CD4+T Cell Isolation Kit |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-CD8+ T細(xì)胞產(chǎn)品
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
130-045-201 | CD8 MicroBeads |
130-055-201 | CD8 Multisort Kit, human |
130-096-495 | CD8+ T Cell Isolation Kit 去除分選，untouched細(xì)胞 |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-CD4+T 細(xì)胞亞群產(chǎn)品
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
130-094-131 | Naive CD4+ T Cell Iso Kit II, human |
130-091-758 | CD62L MicroBeads, human |
130-045-901 | CD45RA MicroBeads, human |
130-046-001 | CD45RO MicroBeads, human |
130-094-302 | CD4+ Central Mem T Cell Isoaltion Kit,human |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-CD8+T 細(xì)胞亞群產(chǎn)品
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
130-093-244 | Naive CD8+ T Cell Iso Kit, human |
130-045-901 | CD45RA MicroBeads |
130-046-001 | CD45RO MicroBeads, human |
130-094-412 | CD8+ Memory T Cell Isolation Kit, human |
CAR-T免疫細(xì)胞療法-其他及配套產(chǎn)品
貨號(hào) | 產(chǎn)品描述 |
130-042-301 | MidiMACS™ Starting Kits，LS |
130-090-329 | MidiMACS™ Starting Kits，LD |
130-091-758 | CD62L MicroBeads |
130-091-221 | autoMACS® Running Buffer – MACS® Separation Buffer |
130-091-222 | autoMACS® Rinsing solution |
130-091-376 | autoMACS® Running Buffer – MACS® Separation Buffer |
五大類3
B淋巴細(xì)胞惡性腫瘤（B cell malignancies），急性骨髓性白血?。╝cute myeloid leukemia），非霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma），T cell malignancies，骨髓瘤（myeloma），實(shí)體瘤（solid malignancies）。
以CD19（代表：諾華的CTL019）為靶點(diǎn)的適應(yīng)癥4
非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、霍奇金淋巴瘤。
參考文獻(xiàn)：
1.Therapeutic T cell engineering.Michel Sadelain, et al.
2.CD19 CAR–T cells of defined CD4+:CD8+ Composition in adult B cell ALL patients.Turtle CJ,et al.
3.Chimeric antigen receptor T cell therapy: 25 years in the making.Saar Gill,et al.
4.CAR-T療法正從臨床試驗(yàn)階段走向產(chǎn)業(yè)化.魏巍.
CAR-T免疫細(xì)胞療法產(chǎn)品資料由紅榮微再編輯整理。紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，主營：干細(xì)胞、醫(yī)療、細(xì)胞治療、器官再生 四大板塊的產(chǎn)品。
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